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如何正確使用UElandy PCR清潔試劑盒?

更新時間:2025-06-24      點擊次數:286
正確使用 UElandy PCR 清潔試劑盒,需嚴格遵循操作流程和注意事項,從準備工作到最終獲取純化產物,每個環節都至關重要。文章中已詳細闡述了其操作步驟和要點,下面為你梳理使用方法:


  1. 準備工作:在開始使用 UElandy PCR 清潔試劑盒前,要先確認實驗設備和試劑狀態。對于負壓法,需正確連接負壓裝置,并將 96 孔 DNA 制備板置于其上;若采用離心法,則準備好離心機和配套的 96 孔 1.6 ml 深孔板。同時,按試劑瓶上指定體積,往 Buffer W2 concentrate 中加入無水乙醇(可用無水乙醇或 95% 乙醇),并充分混合均勻,以此獲得用于洗滌的 Buffer W2 。

  2. 結合反應:在 PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加入 3 倍體積的 Buffer PCR - A。如果 Buffer PCR - A 的用量不足 100μl,需將其加至 100μl。隨后,充分混合均勻,確保反應液與 Buffer PCR - A 融合。接著,將混合液轉移到 96 孔 DNA 制備板中。對于負壓法,開啟負壓裝置,并調節負壓至 - 25 - 30 英寸汞柱,緩慢吸掉板中的溶液,促使 DNA 牢固結合在硅膠膜上;離心法則是將 96 孔 DNA 制備板置于 96 孔 1.6 ml 深孔板中,以 1000 x g 離心 1 min,棄去濾液,實現 DNA 與硅膠膜的結合 。

  3. 洗滌步驟:向 96 孔 DNA 制備板中加入 0.3 ml Buffer W2。負壓法下,再次開啟負壓吸盡管中溶液;離心法是以 1000 x g 離心 1 min,棄去濾液。此洗滌步驟需重復兩次,從而清除結合在硅膠膜上的鹽分及其他小分子雜質 。

  4. 干燥處理:負壓法需保持負壓狀態,將 96 孔 DNA 制備板抽吸 10 min,盡量去除殘留液體,之后將導流管朝下,在長纖維性紙巾上用力拍擊 6 次,進一步排除可能殘留的液體;離心法是將 96 孔 DNA 制備板再次置于 96 孔 1.6 ml 深孔板中,以 3000 x g 離心 10 min,盡可能去除殘留液體,為后續洗脫做準備 。

  5. 洗脫 DNA:將 96 孔 DNA 制備板置于 96 孔 V 型底板上,在膜正中央加入 25 - 30μl 水或 Eluent,室溫靜置 1 min,使洗脫液充分浸潤硅膠膜。隨后,以 3000 x g 離心 5 min,將純化后的 DNA 洗脫到 V 型底板中。此時,便可獲得高純度的 PCR 產物,用于后續的限制性酶切、連接反應、分子雜交以及自動化熒光測序等實驗 。

  6. 注意事項:使用過程中,務必嚴格按照試劑盒說明書進行試劑添加與操作條件控制。比如,Buffer W2 concentrate 使用前加入無水乙醇的操作必須準確無誤;進行洗脫時,若將洗脫液或水加熱至 65℃,能夠有效提高洗脫效率;考慮到 DNA 分子呈酸性,建議將純化后的 DNA 保存在 2.5 mM Tris - HCl,pH 8.5 的洗脫液中,以維持 DNA 的穩定性 。



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